Помощь студентам дистанционного обучения: тесты, экзамены, сессия
Помощь с обучением
Оставляй заявку - сессия под ключ, тесты, практика, ВКР
Заявка на расчет

Лабораторная работа по дисциплине «Микробиология» для ВГУ

Автор статьи
Валерия
Валерия
Наши авторы
Эксперт по сдаче вступительных испытаний в ВУЗах

Лабораторное занятие 14. Анаэробное дыхание: нитрат- и сульфатредуцирующие бактерии

Анаэробное дыхание: нитрат- и сульфатредуцирующие бактерии

Цели занятия:
  1. Ознакомиться с особенностями функционирования ЭТЦ прокариот при анаэробном дыхании;
  2. Провести качественную реакцию на присутствие в почве денитрифицирующих бактерий;
  3. Провести качественную реакцию на присутствие в пробах воды сульфатредуцирующих бактерий.
Материалы и оборудование: микроскопы, предметные стекла, покровные стекла, культура нитратредукторов, реактив Грисса, чашка Петри, шпатель, культура сульфатредукторов. Дыхание – это процесс образования энергии, сопряженный с функционированием электронтранспортной цепи. Сложные органические соединения расщепляются на мономеры (аминокислоты, жирные кислоты, моносахариды), которые через несколько реакций превращаются в глюкозу. Глюкоза окисляется до пирувата через гликолиз (рис. 12). При этом затрачивается две молекулы АТФ на активацию субстрата, а затем выделяется четыре молекулы АТФ. Таким образом, энергетический выход гликолиза составляет две молекулы АТФ на одну молекулу глюкозы. Образующийся в ходе гликолиза пируват окисляется до ацетил-КоА в результате работы пируватдекарбоксилазного комплекса. При этом образуется одна молекула АТФ из каждой молекулы пирувата. Ацетил-КоА полностью окисляется в цикле Креббса до углекислого газа и воды (рис. 12). При этом из одной молекулы ацетил-КоА образуется одна молекула АТФ, одна молекула FADH2 и три молекулы NADH. FADH2 и NADH сбрасывают электроны в электронтранспортную цепь. В зависимости от конечного акцептора электронов при окислении одной молекулы NADH образуется одна, две или три молекулы АТФ, а из одной молекулы FADH2 образуется одна или две молекулы АТФ. Различают аэробное и анаэробное дыхание. При аэробном дыхании конечным акцептором электронов является кислород, а при анаэробном – какое-либо другое окисленное органическое или неорганическое соединение (фумарат, железо (III), сульфат, нитрат). При аэробном дыхании электронтранспортная цепь функционирует полностью, и в ней имеется три пункта фосфорилирования (рис. 13). Соответственно, из каждой молекулы NADH образуется 3 АТФ, а из каждой молекулы FADH2 – 2 АТФ. Рассчитаем количество АТФ, образующихся из одной молекулы глюкозы при аэробном дыхании (донор электронов – глюкоза, акцептор – кислород). В ходе гликолиза затрачивается 2 АТФ и образуется 4 АТФ и 2 NADH. Далее дважды работает пируватдекарбоксилазный комплекс и образует 2 молекулы NADH. Затем дважды работает цикл Кребса. При этом образуются 2 молекулы АТФ, 6 молекул NADH и 2 молекулы FADH2. Всего образуется 4 молекулы АТФ, 10 молекул NADH и 2 молекулы FADH2. В результате функционирования ЭТЦ образуется 10*3=30 молекул АТФ из молекул NADH и 2*2=4 молекулы АТФ из молекул FADH2. Таким образом, энергетический выход аэробного дыхания на глюкозе составляет 4+30+4=38 молекул АТФ. В случае анаэробного дыхания дыхательная цепь укорочена с конца: терминальный акцептор принимает электроны на уровне цитохрома или цитохрома с, соответственно в дыхательной цепи будет два или один пункт фосфорилирования (рис. 14). Следовательно, анаэробное дыхание менее энергодающий процесс, чем аэробное. Пример. Рассчитать количество образующихся АТФ в случае, если донором электронов выступает фруктозо-6-фосфат, а акцептором электронов – нитрат. В этом случае затрачивается на одну молекулу АТФ меньше в ходе гликолиза. Нитраты принимают электроны с цитохрома b. Следовательно, из одной молекулы NADH образуется одна молекула АТФ, а из FADH2 АТФ не образуется. Таким образом, общее количество АТФ: 5+10*1+2*0=15 АТФ. Задание.
  1. Рассчитать количество образующихся АТФ а случае, если донором электронов выступает пируват, а акцептором электронов – сульфат.
  2. Рассчитать количество образующихся АТФ а случае, если донором электронов выступает глюкоза, а акцептором электронов – фумарат.
  3. Рассчитать количество образующихся АТФ а случае, если донором электронов выступает цитрат, а акцептором электронов – Fe(III).
  4. Рассчитать количество образующихся АТФ а случае, если донором электронов выступает глицеральдегид-3-фосфат, а акцептором электронов – нитрит.
Нитратредуцирующие (=денитрифицирующие) бактерии Денитрифицирующие бактерии — бактерии, восстанавливающие нитраты до молекулярного азота. К ним относятся представители более 150 видов из 50 родов (в том числе PseudomonasAchromobacterBacillus и Micrococcus). Это физиологическая, а не таксономическая группа. Они обитают в почве, воде и донных отложениях. Полную денитрификацию до образования газообразных продуктов проводят только прокариоты. Все денитрифицирующие бактерии — факультативные анаэробы. Попадая в анаэробные условия, они переключаются с кислородного дыхания на менее энергодающее нитратное дыхание. В этом случае терминальным акцептором электронов служит нитрат, который принимает электроны на уровне цитохрома b. Нитрат последовательно восстанавливается до нитрита, окиси азота, закиси азота и газообразного азота (рис. 15). Реакция восстановления нитрата в нитрит катализируется периплазматической нитратредуктазой Nap или мембрансвязанной нитратредуктазой Nar. Дальнейшее восстановление нитрита катализируется NO-образующей нитритредуктазой, редуктазой NO (Nor) и редуктазой N2O (Nos). Денитрификация имеет как положительное, так и отрицательное значение. Ее минусом является образование парникового газа N2O, который способствует разрушению озонового слоя и удаление из почву доступной формы азота. Плюс же заключается в удалении из почвы избытков нитрата, который в больших концентрациях является канцерогеном и может вызывать евтрофикацию водоемов. Выявление денитрифицирующих бактерий Присутствие в почве денитрифицирующих бактерий определяют по образованию разрывов в агаре из-за образования газообразных продуктов на твердой среде Березовой. Среда Березовой Состав (в граммах на 1 л дистиллированной воды): цитрат калия или натрия — 2,0; KNO3— 1,0; KH2PO4— 1,0; K2HPO4 — 1,0; MgSO4·7H2O — 2,0 г; CaCI2·6H2O — 0,2 г; FeCI3·6H2O — следы (1 мл 1%-ного раствора на 1 л среды). Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин. Срок хранения среды — не более 6 мес; в холодильнике — не более 10 дней. В стерильные пробирки вносят по 1 г почвы, заливают расплавленной и охлажденной до 40-50 0С средой, закрывают резиновыми пробками и помещают в термостат на 37 0С. Одну пробирку для контроля заливают средой, но не вносят в нее почву. По истечении 7 суток в контрольной пробирке внешний вид среды не изменяется, в опытных пробирках появляются разрывы в агаре за счет образования газообразных продуктов в процессе денитрификации. Качественная реакция на нитриты Об образовании в процессе денитрификации нитрита из нитрата судят по качественной реакции на нитриты с реактивом Грисса. На планшет или в чашку Петри капают каплю реактива Грисса и каплю исследуемой среды. В случае присутствия в среде нитритов цвет реактива изменяется на розовый. Сульфатредуцирующие (=десульфатирующие, =сульфидогенные) бактерии Сульфатредукторы — прокариоты, способные к анаэробному дыханию с использованием в качестве конечного акцептора электронов сульфата. Они широко распространены в илах, а также в симбиотических анаэробных нишах. Это физиологическая, а не таксономическая группа. К ней относятся бактерии (DesulfobacterDesulfovibrioDesulfobulbusDesulfonemaDesulfosarcinaDesulfomonasThermodesulfobacterium) и археи (ArcheoglobusThermocladiumCaldivigra). Сультатредукторы восстанавливают сульфат до сульфита, который в дальнейшем может окисляться до сульфида. Образование сульфита идет через промежуточный продукт аденозинфосфосульфат (АФС) (рис. 16). Этот процесс катализируется АТФ-сульфурилазой и АФС-редуктазой. Сульфат принимает электроны на уровне цитохрома с. Поэтому сульфатное дыхание еще менее энергодающее, чем нитратное. Обнаружение сульфатредуцирующих бактерий Сульфатредуцирующие бактерии, как Desulfovibrio, превращают сульфат в сульфид, который, реагируя с ионами железа, образует черный осадок. Для культивирования создают анаэробные условия, заполняя средой максимально пробирку с завинчивающейся крышкой Состав среды для обнаружения сульфатредуцирующих бактерий в воде, грамм/литр: Часть А:
  • Пептический перевар животной ткани 2,00;
  • Мясной экстракт 1,00;
  • Магния сульфат 2,00;
  • Натрия сульфат 1,50;
  • Калия гидрофосфат 0,50;
  • Кальция хлорид 0,10.
  • Гомогенный сыпучий порошок желтого цвета.
Часть В:
  • Железа аммонийного сульфат 0,392;
  • Натрия аскорбат 0,10;
  • Гомогенный сыпучий порошок кремово-белого цвета.
Часть С:
  • Натрия лактат 3,50.
  • Бесцветный раствор.
  • Конечное значение рН (при 25ºС) 7,5 ± 0,2.
  • Готовая среда светло-желтого цвета, прозрачная, слегка опалесцирует.
Размешать 7,1 г порошка части А в 900 мл дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в течение 15 мин. В день использования среды приготовить раствор части В в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизовать фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Асептично добавить 100 мл части В в 900 мл части А. Затем добавить к полученной смеси часть С, стерилизованную отдельно автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в течение 15 мин. Тщательно перемешать и асептично разлить полную среду по стерильным пробиркам с завинчивающимися крышками, максимально заполняя их. Задание. 1) Оценить рост нитратредукторов на твердой среде Березовой 2) Провести качественную реакцию на образование нитритов 3) Оценить рост сульфатредукторов из проб воды.  

или напишите нам прямо сейчас

Написать в WhatsApp Написать в Telegram

О сайте
Ссылка на первоисточник:
https://muctr.ru
Поделитесь в соцсетях:

Оставить комментарий

Inna Petrova 18 минут назад

Нужно пройти преддипломную практику у нескольких предметов написать введение и отчет по практике так де сдать 4 экзамена после практики

Иван, помощь с обучением 25 минут назад

Inna Petrova, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Коля 2 часа назад

Здравствуйте, сколько будет стоить данная работа и как заказать?

Иван, помощь с обучением 2 часа назад

Николай, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Инкогнито 5 часов назад

Сделать презентацию и защитную речь к дипломной работе по теме: Источники права социального обеспечения. Сам диплом готов, пришлю его Вам по запросу!

Иван, помощь с обучением 6 часов назад

Здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Василий 12 часов назад

Здравствуйте. ищу экзаменационные билеты с ответами для прохождения вступительного теста по теме Общая социальная психология на магистратуру в Московский институт психоанализа.

Иван, помощь с обучением 12 часов назад

Василий, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Анна Михайловна 1 день назад

Нужно закрыть предмет «Микроэкономика» за сколько времени и за какую цену сделаете?

Иван, помощь с обучением 1 день назад

Анна Михайловна, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Сергей 1 день назад

Здравствуйте. Нужен отчёт о прохождении практики, специальность Государственное и муниципальное управление. Планирую пройти практику в школе там, где работаю.

Иван, помощь с обучением 1 день назад

Сергей, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Инна 1 день назад

Добрый день! Учусь на 2 курсе по специальности земельно-имущественные отношения. Нужен отчет по учебной практике. Подскажите, пожалуйста, стоимость и сроки выполнения?

Иван, помощь с обучением 1 день назад

Инна, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Студент 2 дня назад

Здравствуйте, у меня сегодня начинается сессия, нужно будет ответить на вопросы по русскому и математике за определенное время онлайн. Сможете помочь? И сколько это будет стоить? Колледж КЭСИ, первый курс.

Иван, помощь с обучением 2 дня назад

Здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Ольга 2 дня назад

Требуется сделать практические задания по математике 40.02.01 Право и организация социального обеспечения семестр 2

Иван, помощь с обучением 2 дня назад

Ольга, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Вика 3 дня назад

сдача сессии по следующим предметам: Этика деловых отношений - Калашников В.Г. Управление соц. развитием организации- Пересада А. В. Документационное обеспечение управления - Рафикова В.М. Управление производительностью труда- Фаизова Э. Ф. Кадровый аудит- Рафикова В. М. Персональный брендинг - Фаизова Э. Ф. Эргономика труда- Калашников В. Г.

Иван, помощь с обучением 3 дня назад

Вика, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Игорь Валерьевич 3 дня назад

здравствуйте. помогите пройти итоговый тест по теме Обновление содержания образования: изменения организации и осуществления образовательной деятельности в соответствии с ФГОС НОО

Иван, помощь с обучением 3 дня назад

Игорь Валерьевич, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Вадим 4 дня назад

Пройти 7 тестов в личном кабинете. Сооружения и эксплуатация газонефтипровод и хранилищ

Иван, помощь с обучением 4 дня назад

Вадим, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Кирилл 4 дня назад

Здравствуйте! Нашел у вас на сайте задачу, какая мне необходима, можно узнать стоимость?

Иван, помощь с обучением 4 дня назад

Кирилл, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Oleg 4 дня назад

Требуется пройти задания первый семестр Специальность: 10.02.01 Организация и технология защиты информации. Химия сдана, история тоже. Сколько это будет стоить в комплексе и попредметно и сколько на это понадобится времени?

Иван, помощь с обучением 4 дня назад

Oleg, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Валерия 5 дней назад

ЗДРАВСТВУЙТЕ. СКАЖИТЕ МОЖЕТЕ ЛИ ВЫ ПОМОЧЬ С ВЫПОЛНЕНИЕМ практики и ВКР по банку ВТБ. ответьте пожалуйста если можно побыстрее , а то просто уже вся на нервяке из-за этой учебы. и сколько это будет стоить?

Иван, помощь с обучением 5 дней назад

Валерия, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Инкогнито 5 дней назад

Здравствуйте. Нужны ответы на вопросы для экзамена. Направление - Пожарная безопасность.

Иван, помощь с обучением 5 дней назад

Здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Иван неделю назад

Защита дипломной дистанционно, "Синергия", Направленность (профиль) Информационные системы и технологии, Бакалавр, тема: «Автоматизация приема и анализа заявок технической поддержки

Иван, помощь с обучением неделю назад

Иван, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru

Дарья неделю назад

Необходимо написать дипломную работу на тему: «Разработка проекта внедрения CRM-системы. + презентацию (слайды) для предзащиты ВКР. Презентация должна быть в формате PDF или формате файлов PowerPoint! Институт ТГУ Росдистант. Предыдущий исполнитель написал ВКР, но работа не прошла по антиплагиату. Предыдущий исполнитель пропал и не отвечает. Есть его работа, которую нужно исправить, либо переписать с нуля.

Иван, помощь с обучением неделю назад

Дарья, здравствуйте! Мы можем Вам помочь. Прошу Вас прислать всю необходимую информацию на почту и написать что необходимо выполнить. Я посмотрю описание к заданиям и напишу Вам стоимость и срок выполнения. Информацию нужно прислать на почту info@the-distance.ru