Лабораторная работа по дисциплине «Микробиология и иммунология» для Тверская ГСХА

Лабораторная работа № 1   УСТРОЙСТВО МИКРОСКОПА И ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ   Цель занятия. Знать правила работы в микробиологической лаборатории. Уметь работать с микроскопом, в том числе с иммерсионным объективом. Зарисовать основные формы микроорганизмов — прокариот. Материалы и оборудование. Микроскопы, набор готовых окрашенных препаратов – мазков микробов, иммерсионное масло. Таблицы микроорганизмов.  

1. Знакомство с правилами работы и поведения в микробиологической лаборатории

  В микробиологической лаборатории студенты овладевают методами микробиологических исследований, проводят научно-исследовательскую работу, знакомятся с общими вопросами, предусмотренными программой по микробиологии. Комнаты для этих лабораторий отводят светлые, просторные, хорошо вентилируемые, с окнами, открывающимися наружу. Пол лаборатории покрывают линолеумом или плиткой. В лаборатории должны быть краны с горячей и холодной водой, ведро для мусора, которое ежедневно опорожняют, моют и дезинфицируют, а также мыло, полотенце и дезинфицирующий раствор. В лабораторных комнатах устанавливают самое необходимое: столы, шкаф для хранения мелкой аппаратуры, красок, реактивов, посуды, инструментов и.т. п. Поверхность столов покрывают пластиком или линолеумом. На столе размещают микроскоп, а также необходимые предметы для микробиологической работы. Все сотрудники микробиологических лабораторий, аспиранты, студенты, приходящие на занятия или для работы в научно-студенческих кружках, прежде чем приступить к работе, обязаны ознакомиться со следующими правилами работы и техники безопасности и строго соблюдать их:

1. В помещении находиться только в халате и белой шапочке или косынке.
2. Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи и входить в верхней одежде. Портфели и сумки складывать в специально отведенном месте.
3. Категорически запрещается в помещении лаборатории есть, пить, курить, хранить продукты питания.

 

4. Нельзя зажигать одну спиртовку от другой (взрывоопасно), следует пользоваться только спичками.
5. Студенты без ведома преподавателя или обслуживающего персонала кафедры не должны включать электроаппаратуру.
6. Необходимо соблюдать осторожность при работе с химическими реактивами.
7. Посуду, инструменты     отработанный    материал     обязательно стерилизуют;
8. Каждый студент должен соблюдать опрятность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование.
9. Перед уходом из лаборатории, тщательно вымыть руки с мылом.
10. После ознакомления  с   техникой   безопасности   при   работе   в микробиологической лаборатории студенты расписываются в журнале.

 

2.  Устройство микроскопа

  Микроскопирование — метод исследования микроорганизмов. Микроскопированием определяют морфологические особенности микробов, их тинкториальные свойства (отношение к различным красителям, методам окраски), наличие специальных структурных элементов (спора, капсула), подвижность. С этой целью пользуются оптическими приборами — микроскопами (световым, люминесцентным или электронным). Наиболее распространенными биологическими микроскопами являются МБР — 1, МБИ

• 1, МБИ — 2 с предельным увеличением до 1350 раз, «Биолам» типа Р, С, Д и др.

Световой микроскоп (рисунок 1) состоит их двух основных частей: механической и оптической. Механическая часть включает подставку /1/, штатив /2/, предметный столик /5/, трубку (тубус) /4/ с вращающийся диском в нижней части (револьвером) /6/, тубусодержатель /3/ с макро /8/- и микрометрическим /9/ винтом для передвижения тубуса вверх и вниз. Предметный столик перемещается в горизонтальной плоскости с помощью двух винтов, находящихся слева и справа. На поверхности столика имеются две клеммы для закрепления препарата. В центре предметного столика находится отверстие для прохождения лучей света, оснащающих препарат. Тубусодержатель поднимается и опускается с помощью макро- и микрометрического винтов, предназначенных для грубой и точной фокусировки объекта. Поворот макрометрического винта на один оборот поднимает или опускает тубусодержатель на 2 мм, микрометрического на — 0,1 мм. Рисунок 1 — Устройство микроскопа «Биолам – Р1» 1 – подставка; 2 – штатив; 3 – тубусодержатель; 4 – тубус; 5 – предметный столик; 6 – револьвер; 7 – винт перемещения конденсора; 8 – макрометрический винт; 9 — микрометрический винт; 10 – конденсор; 11 – рукоятка диафрагмы конденсора; 12 – зеркало; 13 – окуляр; 14 – объективы   Оптическая часть микроскопов состоит из осветительного аппарата, объективов /14/и окуляров /13/. Осветительный аппарат расположен под предметным столиком и состоит из зеркала /12/, конденсора /10/ и ирисовой диафрагмы. Зеркало имеет две поверхности: плоскую и вогнутую; оно отражает световые лучи и направляет их к конденсору. При дневном свете пользуются плоской поверхностью, при искусственном источнике света — вогнутой. Конденсор — собиратель световых лучей, состоит их двух линз: верхней плоско-выпуклой и нижней двояковыпуклой. Для уменьшения освещенности поля зрения конденсор опускают для увеличения доступа света — поднимают диафрагму, прикрепленную к нижней части конденсора также используют для регулирования освещенности поля зрения. Объективы ввинчиваются в гнезда револьвера и состоят из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Главная линза – фронтальная — направлена к препарату. Она обеспечивает необходимое увеличение изображаемого объекта. Остальные линзы — коррекционные, исправляют недостатки полученного изображения. Объективы различают сухие и погруженные иммерсионные (водные, масляные). Сухими называются объективы, при работе, с которыми между   фронтальной линзой и рассматриваемым объектом находится слой воздуха. Иммерсионными называются объективы, фронтальная линза которых при работе погружается в нанесенную на препарат каплю жидкости с показателем преломления, близким к показателю преломления стекла (1,53). В качестве иммерсионной жидкости используют кедровое масло (показатель преломления 1,515). Световые лучи при переходе из стекла в слой иммерсионного масла не преломляются и, не отражаясь, попадают в объектив, таким образом достигается наилучшее освещение рассматриваемого предмета. Окуляр находится в верхней части тубуса, состоит из верхней глазной и нижней собирательной линз, заключенных в металлическую оправу. Окуляр лишь увеличивает изображение, данное объективом. Общее увеличение микроскопа определяют умножением показателя степени увеличения объектива на степень увеличения окуляра (например, 90 Х 7 = 630 раз). Пользуясь биологическим микроскопом, можно рассмотреть предмет размером не менее 0,2 мкм (разрешающая способность микроскопа).  

3.  Правила микроскопирования

 

1. При работе с микроскопом лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого.
2. Переносить микроскоп необходимо двумя руками: одной держать тубусодержатель, другой — основание микроскопа.
3. Микроскоп после работы надо ставить в футляр, чтобы предохранить от попадания пыли и влаги.
4. На рабочем столе микроскопы ставят тубусодержателем к себе на расстоянии 3-5 см от края стола.
5. Объективы и окуляры протирать замшей или фланелью.
6. При работе с объективами малого и среднего увеличения тубус перемещать только макрометрическим винтом.
7. При работе с объективом ´8 расстояние от исследуемого препарата должно быть около 1 см, с объективом ´40 — 0,6 см и с объективом ´90 — около 0,15 мм.
8. Для получения максимального освещения поля зрения устанавливают объектив наименьшего увеличения. Наблюдая в окуляр, направляют отраженные зеркалом лучи, от источника света через отверстие диафрагмы- конденсора на объектив. При правильной установке поле зрения микроскопа будет иметь форму круга, хорошо и равномерно освещенного.
9. Отрегулировав освещение, на предметный столик помещают препарат и, укрепив клеммами предметное стекло, рассматривают его слабым (´8) сухим объективом.

 

4. Иммерсионная система микроскопа

  Порядок пользования иммерсионной системой:

1. Поднимают конденсор и открывают диафрагму.
2. Наводят свет с малым, увеличением сухой системы.
3. Наносят на препарат каплю иммерсионного масла (вазелинового), не размазывая ее по стеклу.
4. При визуальном наблюдении сбоку опускают тубус поворотом макрометрического винта до соприкосновения фронтальной линзы с каплей и слегка ее раздавливают.
5. Смотря в окуляр медленно поднимают тубус макрометрическим винтом до момента появления изображения рассматриваемого предмета.
6. Для получения четкого изображения переходят к работе с микрометрическим винтом, вращая его легким движением в ту или другую сторону.
7. Препарат рассматривают в нескольких местах, передвигая предметный столик боковыми винтами, одновременно медленно вращают микровинт с целью фокусирования объектива.
8. Степень освещенности регулируют, опуская или поднимая конденсор.
9. По окончании микроскопирования тубус поднимают макрометрическим винтом, препарат убирают, а фронтальную линзу осторожно протирают.

Ход работы

 

1. Используя иммерсионную систему микроскопа, просмотреть готовые препараты: шаровидные, палочковидные, извитые формы микроорганизмов.
2. Сделать зарисовки микроорганизмов в тетради, обращая внимание на форму и взаимное расположение клеток.

 

Контрольные вопросы

1. Каковы основные    правила    техники    безопасности    при    работе    в микробиологической лаборатории?
2. Механические детали микроскопа и их назначение.
3. Как устроены части оптической системы микроскопа, их назначение.
4. Какие основные характеристики объективов?
5. Что такое апертура?
6. Как определить увеличение микроскопа?
7. Что такое полезное увеличение микроскопа? Как его определить?