КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА По дисциплине «Основы сельскохозяйственной биотехнологии» Содержание   20 Векторы, используемые в генетической инженерии. 3 39 Этапы создания трансгенных растений. 5 52 Культура каллусных тканей. Каллусогенез, как основа создания клеточных культур  8 73 Микоризация растений. 11 86 Переработка органических отходов, разложение ила сточных вод в анаэробных условиях. 13 94  Биотехнологические методы приготовления и консервирования кормов. 17 Список литературы.. 19  

   

20 Векторы, используемые в генетической инженерии

  Вектор (англ. vector) – это «переносчик инфекции». Данное понятие применяется в разнообразных случаях. Примеры векторов из разных областей биологии: 1) кровососущие насекомые выступают как векторы патогенных микроорганизмов и вирусов, вызывающих болезни позвоночных животных; 2) насекомое из рода Sire.х – это вектор, переносящий пропагулы базидианального гриба Aniylostereum, вызывающего гниль ствола хвойных деревьев [4]. Молекулярный вектор – это молекула ДНК, в которую возможна встройка фрагмента чужеродной ДНК. Она способна переносить данный фрагмент в своем составе в реципиентные клетки, самостоятельно реплицироваться и стабильно поддерживаться в реципиентных клетках, либо встраиваться в геном хозяина и также стабильно в нем поддерживаться. По другому определению, молекулярные векторы – это гибридные молекулы ДНК, несущие искусственно встроенный фрагмент, представляющий тот или иной интерес, и способные амплифицироваться (размножаться) в живых клетках отдельно от основного генома хозяина или встраиваться в него. Предпосылки разработки и применения молекулярных векторов в генной инженерии и биотехнологии [4].

1. Открытие нуклеиновых кислот и генетического кода;
2. Открытие внехромосомных элементов у про- и эукариот – плазмид;
3. Открытие вирусов и в особенности механизмов встраивания вирусной ДНК в геном хозяина;
4. Разработка методов выделения высокоочищенных препаратов неповрежденных плазмид и неповрежденной ДНК вирусов;
5. Раскрытие механизмов проникновения чужеродной ДНК в клетки;
6. Открытие ферментов, обеспечивающих репликацию и модификацию ДНК.

Назначение векторов [4]: В фундаментальной науке векторы служат для изучения отдельных генов и целых геномов путем их клонирования и последующего сиквенса, для изучения функций генов и молекулярных механизмов их экспрессии. В инженерии векторы используются с целью создания генно-модифицированных организмов продуцентов. Главнейшие типы векторов (по назначению):

1. Клонирующие векторы – служат для наработки большого количества копий встроенного фрагмента ДНК (например, с целью его последующего сиквенса – расшифровки последовательности);
2. Экспрессирующие векторы – служат для получения чужеродного белка в организме-хозяине (организме-продуценте); векторы, обеспечивающие правильную и эффективную экспрессию чужеродных генов в клетках. Встроенный в вектор ген не только амплифицируется, но на его основе происходит образование мРНК и затем белков. Экспрессирующие векторы используются для создания штаммов микроорганизмов, продуцирующих чужеродный белок в повышенных количествах.
3. Нацеленные векторы – служат для введения дефектного гена в геном изучаемого oрганизмa с целью выявления фенотипического проявления генов. Вектор, используемый для инактивации какого-либо гена при генетических исследованиях определенных организмов, называют нацеленным.

По поведению относительно генома хозяина векторы делят на интегративные и неинтегративные. Если вектор обеспечивает встройку чужеродной ДНК в геном клетки, то он называется интегративным.      

39 Этапы создания трансгенных растений

  Процесс получения трансгенных растений начинается с введения требуемых генов в недифференцированные клетки таким образом, чтобы они интегрировались в хромосомы. Введение чужеродных генов в клетки растений облегчается, если их клеточные стенки удаляют с помощью гидролитических ферментов — пектиназы и (или) целлюлазы, что приводит к образованию протопластов. Чужеродные гены, находящиеся в составе векторных плазмид, вводят в протопласты одним из стандартных способов с использованием эндоцитоза, или бомбардировки микрочастицами, нагруженными векторной ДНК. После этого протопласты в течение нескольких дней культивируют на питательной среде для восстановления клеточных стенок и образующиеся клетки-трансфектанты используют для регенерации целых растений [2]. Основным направлением применения трансгеноза для генетической модификации культурных растений является повышение их устойчивости к неблагоприятным воздействиям окружающей среды, в частности вирусам и гербицидам. Метод получения трансгенных растений, устойчивых к вирусам, основан на введении в них трансгенов, экспрессирующих в клетках моноклональные антитела, направленные против вирусных белков. С использованием такого метода создали эффективную систему защиты растений от вируса морщинистой мозаики артишока (AMCV) . Ранее было практически невозможно с помощью селекции создать растения с повышенным содержанием витаминов. Однако с развитием биохимии растений стало более ясным, какие метаболические пути являются критическими для биосинтеза витаминов. Например, для синтеза β-каротина (провитамина А) в растениях необходима фитоен-синтетаза. Ген фитоен-синтетазы из нарцисса ввели в эндосперм риса и таким образом был получен «золотой рис», который может помочь 2 млрд. человек, страдающих от дефицита витамина А, для которых рис – основная пища. Так же недавно были получены трансгенные растения земляники с повышенным синтезом L-аскорбиновой кислоты. Созданы растения сои с повышенным в пять раз содержанием витамина Е в семенах [2]. Конструирование трансгенных растений – продуцентов целевых белков. Растения являются удобной, безопасной и экономически выгодной альтернативой для продукции различных белков, вакцин и антител по сравнению с системами экспрессии на основе микроорганизмов, культур животных клеток или трансгенных животных. За последние 20 лет множество ценных белков эффективно экпрессировано в растениях. Это белки человеческой сыворотки, регуляторы роста, антитела, вакцины, промышленные ферменты, биополимеры и реагенты для молекулярной биологии. Растительные системы имеют перспективы успешного использования для производства рекомбинантных белков в промышленном масштабе. Рекомбинантные белки, экспрессируемые в растениях [2]. Первым фармацевтически значимым белком, экспрессированным в растениях табака и подсолнечника в 1986 г., явился человеческий гормон роста. С тех пор множество других ценных белков были синтезированы в самых различных растениях. Среди разнообразия рекомбинантных белков, продуцируемых растениями есть белки, используемые в молекулярно-биологических исследованиях (авидин), молочные белки, используемые в качестве пищевых добавок (казеин) и белки-полимеры для медицинских и промышленных целей (коллаген и эластин). Ценные биологически активные пептиды можно получать, встраивая их в состав запасных белков семян. Так, последовательность ДНК, кодирующая пентапептидный нейрогормон животных лейэнкефалин была встроена в ген 2S альбумина запасного белка семян Arabidopsis thaliana. Экспрессия этого гена в трансформированных растениях рапса и арабидопсиса позволила получить их семена с высоким содержанием рекомбинантного белка. Целевой пептид легко выделялся из рекомбинантного белка с помощью специфического протеолитического расщепления. Создание трансгенных растений в настоящее время развиваются по следующим направлениям [2]:

1. Получение сортов с/х культур с более высокой урожайностью
2. Получение с/х культур, дающих несколько урожаев в год (например, в России существуют ремантантные сорта клубники, дающие два урожая за лето)
3. Создание сортов с/х культур, токсичных для некоторых видов вредителей (например, в России ведутся разработки, направленные на получение сортов картофеля, листья которого являются остро токсичными для колорадского жука и его личинок)
4. Создание сортов с/х культур, устойчивых к неблагоприятным климатическим условиям (например, были получены устойчивые к засухе трансгенные растения, имеющие в своем геноме ген скорпиона)
5. Создание сортов растений, способных синтезировать некоторые белки животного происхождения (например, в Китае получен сорт табака синтезирующий лактоферрин человека)

Этапы получения трансгенных растений: 1 этап – выбор гена и его клонирование; 2 этап – подбор генотипа растения-реципиента; 3 этап – создание генной конструкции, содержащей выбранный ген и векторную молекулу-переносчик ДНК; 4 этап – перенос векторной молекулы в геном растения с помощью наиболее приемлемого метода; 5 этап – регенерация растений из трансформированных клеток и отбор трансгенных растений [2].   Таким образом, создание трансгенных растений позволяет решить целый комплекс проблем, как агротехнических и продовольственных, так и технологических, фармакологических и т.д. Кроме того, уходят в небытие пестициды и другие виды ядохимикатов, которые нарушали естественный баланс в локальных экосистемах и наносили невосполнимый ущерб окружающей среде.

52 Культура каллусных тканей. Каллусогенез, как основа создания клеточных культур

  Каллусная культура — это неорганизованно пролиферирующая ткань, возникающая из дедифференцированных клеток. «Каллус-мозоль» может образовываться на растении при поранении. Это естественный процесс, который можно наблюдать в природе. На месте ранения часть ткани утрачивает прежние связи с организмом, для их восстановления необходимо нарастание клеточной массы. То же происходит и на изолированных кусочках ткани (эксплантах) в культуре in vitro. При помещении фрагмента ткани или органа растения на питательную среду соответствующего состава может происходить дедифференциация соматических клеток с образованием каллусной ткани (рис. 1, рис. 2) [5, с. 19]. Рисунок 1 – Получение каллусной ткани из различных эксплантов: фрагментов стебля, корня, листа, лепестков, тычинок   Рисунок 2 – Каллус, образованный в культуре незрелых зародышей ячменя (а, б) и пшеницы (в) [5, с. 20] Первый этап дедифференциации клетки связан с ее вхождением в клеточный цикл, что происходит под действием фитогормонов — ауксинов и цитокининов. Три фазы роста клеток: 1 — деление, 2 — растяжение, 3 — дифференцировка (утолщение вторичной клеточной оболочки и потеря способности к делению). Для того чтобы дифференцированные клетки вновь приобрели способность к делению, необходимо, чтобы произошла их дедифференцировка, т.е. клетки должны как бы возвратиться в меристематическое состояние. Размножение дедифференцированных клеток приводит к анархическому, неорганизованному росту, в результате чего образуется каллусная ткань. Таким образом, превращение специализированной клетки в каллусную связано с индукцией клеточного деления, способность к которому она потеряла в процессе дифференцировки. Если дедифференцировка специализированной клетки обуславливается индукцией деления под влиянием цитогормонов, то дедифференцировка делящейся меристематической клетки связана с остановкой делений, деспециализацией клетки и только после этого — с индукцией делений, приводящей к каллусообразованию. Одни цитокинины в среде (сердцевинной паренхимы табака) блокируют клеточный цикл, клетки только старятся, как и без гормонов, но не растут; а у семядолей подсолнечника в таких же условиях каллус образуется. Как правило, для индукции каллусной ткани необходимо присутствие двух гормонов: ауксинов (дедифференцировка и подготовка к делению) и цитокининов (пролиферация — деление). Но, например, зрелые и незрелые зародыши пшеницы и ячменя дают каллусообразование только с ауксинами (2,4-Д). Вероятно, это связано с наличием у последних достаточного количества эндогенных цитокининов, о чем свидетельствует их прорастание на среде МС без гормонов, т.е. идет увеличение массы стебля и корня — процесс, активируемый цитокининами. Есть достаточно экспериментальных данных о влиянии эндогенных фитогормонов, т.е. гормонального статуса донорного растения, на процесс индукции каллусов в культуре изолированных тканей растений [5, с. 21]. Имеются данные, что не только ауксины и цитокинины вызывают деление клеток, приводящее к образованию каллуса, но и так называемые элиситоры (от англ. Elect — выбирать) — метаболические вещества, индуцирующие защитные системы растений. Элиситоры — это БАВ, дерепрессирующие гены и, как следствие, активирующие клеточные деления, сравнительно быструю дедифференцировку специализированных клеток, сопровождающуюся активацией белкового синтеза. Отмечено, что при повреждении растительных тканей продукты деградации клеточных стенок действуют как гормоны, которые распространяются по растению, связываются со специфическими рецепторами на клеточных мембранах и инициируют каскад защитных механизмов — такие молекулы называются эндогенными элиситорами. Эффект, вызываемый действием одних и тех же гормонов, может быть различным в зависимости от физиологической характеристики ткани-мишени. Компетентность ее в рассмотренных примерах определяется степенью дифференцировки клеток.   Переход клетки in vitro из дифференцированного состояние к дедифференцировке и активным клеточным делениям обусловлен изменением активности генов (эпигенной изменчивостью). Активирование одних генов и репрессирование других приводит к изменению в белковом составе клеток. В каллусных клетках появляются специфические белки и одновременно исчезают или уменьшаются в количестве белки, характерные для фотосинтезирующих клеток листа. У двудольных растений процесс репрессии и депрессии генов, лежащий в основе дифференцировки, происходит легче, чем у однодольных [5, с. 22]. Для того чтобы не произошло старения, утраты способности к делению и отмиранию каллусных клеток, первичный каллус через 4-6 недель переносят на свежую питательную среду (пассирование). При регулярном пассировании способность к делению может поддерживаться в течение десятков лет. Культура каллусной ткани моркови, полученная Готре более 50 лет назад, до сих пор растет в коллекции.

73 Микоризация растений

  Микориза представляет собой симбиоз между растением и мицелия гриба, обитающими в грунте. Определенные виды грибов сотрудничают с конкретными видами растений. В естественных условиях союзники находятся сами. В саду мы должны им в этом помочь, применяя соответствующие «вакцины», применяемые для грунта [3]. Микориза, (с греческого микос (μύκης) – гриб и риза (ρίζα) – корень) – явление взаимовыгодного сосуществования между живыми клетками растений, и непатогенными (не вызывающими заболеваний) грибами, заселяющими грунт. Определение микориза дословно значит «грибокорень«. Микориза это содружество между растениями и грибами, приводящее к взаимной выгоде. Грибы используют продукты фотосинтеза растений, получая растительные сахара, которые сами не могут производить. Растения в свою очередь, благодаря микоризе, получают гораздо больше выгод. Гифы мицелия проникают в проникают в клетки коры корня (Эндомикориза) или остаются на поверхности корня, оплетая его плотной сетью (Эктомикориза), благодаря чему увеличивается способность поглощения влаги и минеральных солей из почвы. Растения начинают сильнее расти, образуют больше цветков и плодов. Становятся также значительно устойчивее и к неблагоприятным условиям – засухе, морозу, несоответствующему рН или чрезмерной засоленности почвы. Микориза защищает растения от болезней (Фузариоза, Фитофтороза). Микориза существует в природе уже миллионы лет – более 80% всех растений остается в симбиозе с микоризными грибами. На приусадебных участках, к сожалению, возникает редко, так как была разрушена в результате интенсивного выращивания и применения химических удобрений и средств защиты растений. Невооруженным глазом (без микроскопа) не удастся проверить, есть ли в садовой земле микориза. Микоризные грибы очень часто погибают во время строительства дома. Глубокие котлованы, оставленные на поверхности грунт, остатки щебня и извести, это основные причины отсутствия микоризы в саду. Самым популярным и наиболее заметным результатом работы микоризы являются лесные грибы. Это плодовые тела эктомикоризовых грибов. Даже новичок в сборе грибов, уже после первого сбора грибов заметит, что конкретные грибы растут только в непосредственной близости от конкретных деревьев [3]. Лисички растут и под лиственными, и под хвойными деревьями, рыжики под соснами, елями и пихтами. Белые грибы можно найти в не слишком густых лесах, преимущественно под дубами, буками, а также соснами и елями. Моховики лучше искать под елями и соснами, а также в лиственных лесах, под дубами и буками. В березовых рощах и под елями растут обабки, а подберезовик под березами, грабами и дубами.  

86 Переработка органических отходов, разложение ила сточных вод в анаэробных условиях

  Отходы, содержащие значительные количества ферментируемых органических соединений, можно подвергать биологической обработке в анаэробных условиях. Хотя анаэробная обработка применяется во многих процессах, основной сферой использования этого метода является переработка избыточного активного ила (рис. 6.3 и 6.5), образующегося при биологической очистке сточных вод. Концентрированный ил образуется на нескольких стадиях, в том числе при отделении твердых частиц на решетках и в первичном отстойнике, а также при росте микроорганизмов в ходе биологического окисления (при вторичной очистке сточных вод) [6]. Ил далее концентрируют или сгущают часто путем простой седиментации; ликвидации ила обычно предшествует операция анаэробной биологической переработки, являющаяся одним из этапов водоочистки. Механизм анаэробной переработки отходов, в котором участвует множество видов микроорганизмов, в самом общем и упрощенном виде можно описать следующей схемой: Рисунок 3 – Механизм анаэробной переработки отходов [6] Механизм анаэробной переработки отходов, в котором участвует множество видов микроорганизмов, в самом общем и упрощенном виде можно описать следующей схемой На первой стадии твердые частицы ила солюбилизируются или диспергируются внеклеточными ферментами, синтезируемыми самыми различными бактериями. В системах для анаэробной обработки ила обнаружены протеолитические, липолитические и некоторые целлюлолитические ферменты. Поскольку в биореакторах для анаэробной переработки ила твердые вещества не накапливаются, то, очевидно, реакции солюбилизации осуществляются достаточно быстро и эта стадия не лимитирует скорость всей последовательности превращений. Экспериментальное изучение следующей стадии анаэробной переработки ила, а именно микробиологического синтеза низкомолекулярных жирных и летучих кислот из растворенных органических веществ, показало, что скорость осуществляющихся на этой стадии реакций также довольно высока. По вполне понятной причине ответственные за эти превращения организмы называют кислотообразующими бактериями; они являются факультативными анаэробными гетеротрофами и лучше всего функционируют в диапазоне рН от 4,0 до 6,5. Главным продуктом этой стадии является уксусная кислота, хотя в некоторых количествах образуются также пропионовая и масляная кислоты [6]. Важнейшим субстратом для последней стадии процесса является уксусная кислота; показано, что около 70 % всего метана образуется именно из этого субстрата. Стадия газификации осуществляется с участием метанобразующих бактерий, являющихся облигатными анаэробами. Эти организмы проявляют наибольшую активность в гораздо более узком диапазоне рН (от 7,0 до 7,8); их сложно выделить в виде соответствующих чистых культур, но в адекватно эксплуатируемом биореакторе (метантенке) смешанная культура этих бактерий находит очень хорошие условия для своей жизнедеятельности. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что превращение летучих кислот в СН4 и СО2 лимитирует скорость всей последовательности превращений. На рис. 4 представлена схема аппарата для анаэробной переработки ила (метантенка). Для предотвращения чрезмерного повышения локальных концентраций кислот содержимое метантенка перемешивают. Создание условий, удовлетворительных как для кислотообразующих, так и для метанобразующих бактерий, обеспечивается поддержанием рН около 7. На рис. 4 указан также выносной теплообменник для поддержания повышенной температуры в резервуаре метантенка. В настоящее время в большинстве случаев температуру содержимого метантенка поддерживают на уровне мезофильного диапазона (около 32-38 °С), который обеспечивает максимальную скорость переработки ила. Имеются указания на то, что скорость процесса можно повысить в еще большей степени, если осуществлять его в термофильном диапазоне (около 55 °С [6]. Впрочем, такой температурный режим применяют сравнительно редко; одной из причин предпочтения, отдаваемого мезофильному диапазону температур, является меньший расход энергии на нагревание метантенка. При эффективном перемешивании и средней температуре (32-35 оС) необходимое для полной переработки ила время его пребывания составляет от десяти до тридцати суток. При анаэробной переработке ила образуется топливо, которое можно использовать для снижения эксплуатационных расходов водоочистных станций. Иногда образующийся при анаэробной переработке ила метан используют вне водоочистной станции для выработки тепла и электроэнергии. Газовая смесь, образующаяся при анаэробной переработке ила и накапливающаяся, как это показано на рис. 4, в верхней части метантенка, состоит в основном из метана (65-70 %) и углекислого газа. В небольших концентрациях в этой смеси содержатся также сероводород (продуцируемый сульфатредуцирующими бактериями), Н2 и CO.   В связи с повышением цен на топливо, однако, процессам анаэробной переработки ила как потенциальному источнику топлива (после обязательного удаления H2S) уделяется все большее внимание. Рисунок 4 – Схема установки для анаэробной переработки ила [6]: 1 — смотровые окна; 2 — труба для выхода газа; 3 — предохранительный клапан для регулирования давления (вакуума); 4 — пламягаситель; 5 — трубопровод для отвода газа; 6 — возвратная вода; 7 — возвратная циркулирующая вода и расширительная камера; 8 — регулируемый слив суспензии ила; 9 — регулятор уровня; 10 — вывод из камеры с илом;11 — возврат воды в нагреватель; 12 — выпуск переработанного ила; 13 — дренажные трубы; 14 — подача сырого ила; 15 — газ; 16 — подача циркулирующей воды; 17 — выносной теплообменник; 18 — возврат циркулирующей воды; 19 — верхний уровень ила.   В результате анаэробной переработки ил легче поддается последующим операциям. Во-первых, содержание органических веществ в иле снижается на 50-60 %. Во-вторых, существенные изменения претерпевают и концентрации других компонентов ила.   После анаэробной переработки ил в гораздо меньшей степени подвержен гниению и легче обезвоживается. После обезвоживания (эту операцию часто осуществляют с помощью ротационного вакуум-фильтра) ил высушивают и затем используют в качестве удобрения, складируют или сжигают.

94  Биотехнологические методы приготовления и консервирования кормов

  Химическое консервирование основано на подавлении (ингибировании) действия ферментов микроорганизмов и самого корма с помощью химических веществ. Консерванты-ингибиторы тормозят биосинтез фермента (генетический уровень) или непосредственно его действие (кинетический уровень); иногда оба действия происходят одновременно. С помощью ингибиторов можно консервировать в различных климатических зонах и при любой погоде все кормовые растения, а также отходы растениеводства и пищевой промышленности независимо от их влажности и сахарного минимума. Химические консерванты значительно снижают потери при консервировании, а в ряде случаев улучшают переваримость питательных веществ корма и обогащают его за счет своих составных элементов. Этот эффективный способ консервирования находит широкое применение во многих странах мира [7, с. 58]. Ингибиторы кинетического уровня могут быть необратимого и обратимого действия. Первые более эффективны в сохранении кормов, а вторые быстрее и легче освобождаются от ферментов кормов в желудочно-кишечном тракте животного. Консерванты могут связываться с активной группой молекулы фермента (кофактором), конкурируя при этом с субстратом. Другие консерванты не конкурируют с субстратом, так как связываются с белковой частью фермента (апоферментом), видоизменяя молекулу фермента, что называют аллостерическим ингибированием. В таком случае консервант может подавлять одновременно несколько ферментов и его действие сильнее, чем у конкурентных консервантов. Ингибирование может происходить по принципу обратной связи, если фермент первой стадии подавляется конечным продуктом ферментативной цепи, которому аналогичен или идентичен консервант. Химические консерванты должны обладать фунгицидным или бактерицидным действием, т. е. убивать грибки (плесени и т. д.), бактерии или вызывать бактериостаз, при котором бактерия остается живой, но временно теряет способность к размножению под влиянием неблагоприятных условий (химического вещества). Взаимодействие консерванта с микрофлорой и кормовыми растениями лучше осуществляется в жидкой среде, поэтому предпочтительны консерванты, хорошо растворимые в воде и соках растений. Вместе с тем они должны быть безвредными для людей и животных и не вызывать коррозии машин. Химическое консервирование целесообразно применять в следующих случаях [7, с. 60]: 1) при заготовке трудносилосующихся и несилосующихся растений; 2) при уборке в условиях сезона дождей, когда другими способами консервирования трудно приготовить корма хорошего качества; 3) в условиях жаркого и сухого климата, когда эпифитная микрофлора бедна молочнокислыми бактериями и быстро развиваются гнилостные бактерии и плесени; 4) при необходимости заготовки слабопровяленных кормов или сена повышенной влажности; 5) при консервировании отходов пищевой промышленности с повышенной влажностью и т. д. В качестве химических консервантов используют неорганические кислоты и их смеси, неорганические соединения (аммонийные соли, соли натрия и др.), органические кислоты и их производные, нейтральные органические вещества, смеси, с включением органических соединений, и газообразные вещества.    

Список литературы

 

1. Аронов Э.Л. Биотехнологии в сельском хозяйстве / Э.Л. Аронов // Техника и оборудование для села. – 2017. – № 2 (164). – С. 24-26.
2. Дыжина А.А. Получение трансгенных растений / А.А. Дыжина// Материалы IX Международной студенческой научной конференции «Студенческий научный форум». – URL: https://scienceforum.ru/2017/article/2017030865 (дата обращения: 11.2020).
3. Микориза растений [Электронный ресурс]. – URL: https://zagorodacha-ru.turbopages.org/zagorodacha.ru/s/mikoriza-rastenij/ (дата обращения: 14.11.2020).
4. Молекулярные векторы, используемые в генетической инженерии [Электронный ресурс]. – URL: http://fi-hi.ru/molekulyarnyie-vektoryi-ispolzuemyie-v/ (дата обращения: 14.11.2020).
5. Сельскохозяйственная биотехнология: краткий курс лекций для студентов III курса направления подготовки 19.03.01 Биотехнология / Сост.: Е.А. Фауст // ФГБОУ ВО Саратовский ГАУ. – Саратов, 2016. – 76 с.
6. Тимощенков Л.В. Анаэробная переработка отходов [Электронный ресурс] /Л.В. Тимощенко, М.В. Чубик. – URL: https://medbe.ru/materials/mikrobiologiya-i-biotekhnologii/anaerobnaya-pererabotka-otkhodov/ (дата обращения: 14.11.2020).
7. Шевелуха В.С. Сельскохозяйственная биотехнология Учебник / B.C. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Е.З. Кочиева и др.; Под ред. B.C. Шевелухи. – 3-е изд., перераб. и доп. – М.: Высш. шк., 2017. – 710 с.